测细菌对抗菌药物敏感性的试验简称药敏试验。用药敏实验进行药物敏感度的测定，可以准确有效的利用药物进行治疗，减少治疗错误，降低经济损失。目前，实验室进行药敏试验的方法主要有扩散法(纸片扩散法和琼脂扩散法)，稀释法(包括琼脂和肉汤稀释法)，抗生素浓度梯度法(E-test法)等等。我们现在用的是第一种方法，具体步骤如下所示：

　　一、实验材料

　　普通营养琼脂培养基(自制)：琼脂、蒸馏水、待测抗生素

　　细菌：带做药敏试验的细菌(一般为病畜心脏、肝脏、肺等)

　　仪器：三角瓶、牛津杯、刻度吸管、滴头、培养皿、天平、高压蒸汽灭菌器、镊子、游标卡尺等

　　二、实验准备

　　菌液的制备：将病料用灭好菌的剪刀剪碎，再倒入适量(病料量1-2倍)蒸馏水，混匀，过滤即得。

　　药液的制备(原料药)：将要做的若干种抗生素与水按照0.01g:10ml的比例配制。例如：精取10mg庆大霉素放入试管再加入10ml的水混匀。此稀释液即为用于做药敏试验的药液。

　　将琼脂与水按照标示量与水混匀后，配制两份，再在高压蒸汽灭菌器中灭菌121.C15分钟，备用。

　　将培养皿、镊子、刻度吸管、三角瓶干热灭菌4小时160.C。

　　三、实验操作方法(牛津杯法)

　　1.培养基的制备：(1)上层：在“超净台”中，先将一份配置好的琼脂均匀的倒入培养皿中，每个培养皿20ml左右。(2)下层：将菌液倒入另一份琼脂(要求温度为40.C左右)，混匀，待前一份凝固后将其均匀地倒入培养皿中，每个培养皿5-6ml，凝固即得。

　　2.以无菌操作将灭菌的不锈钢小管，放置在培养基上，使其与培养基接触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。每个培养皿可放4-6支小管。待分钟后，分别向各小管中滴加配制好的药液，液面与钢管平行。置37.C培养14-18小时，观察结果。

　　四、结果观察

　　先将钢管小心地用镊子取出，会看到在涂有细菌的培养基上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，因此在小管周围一定距离内的细菌生长受到抑制。过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与药物浓度，细菌浓度有关系。